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    基因编辑动物模型

    ES细胞打靶

    在小鼠胚胎干细胞(ES 细胞)中进行 DNA 同源重组,将 ES 细胞重新注射到囊胚腔中,可以形成嵌合胚胎,并能在假孕小鼠体内发育,最终发育为嵌合体小鼠。这种嵌合小鼠的组织细胞(包括生殖细胞)可以分别来自囊胚的细胞和被注射的ES细胞。因此,通过嵌合小鼠和野生型小鼠的交配,ES 细胞中的遗传信息就能够传递到后代的小鼠个体中。



    利用ES细胞打靶技术建立基因修饰小鼠模型的主要技术路线:

    (1)构建重组基因载体(正负双向选择系统)

    (2)用电穿孔等方法把重组DNA转入受体ES细胞内

    (3)用选择培养基筛选抗药ES细胞,并利用PCR或或 Southern blot 等方法鉴定发生正确同源重组的ES细胞

    (4)将中靶ES细胞注射到受体囊胚中,将注射后存活的胚胎移植到假孕小鼠子宫中,让其受孕,待小鼠出生后,

    通过观察毛色的嵌合与否和嵌合程度判断是否获得嵌合体小鼠。



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