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    详细内容

    过表达目的基因

    过表达慢病毒构建及包装

     

    慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。

    直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)?梢酝ü虻シ绞,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株?捎糜诨蚯贸、基因治疗和转基因动物研究。无需任何转染试剂,操作简便?梢愿菘突枰票付嘀直昙。



    实验流程:

    1、含有目的基因的慢病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。

    2、 慢病毒表达载体与包装系统共转染病毒包装细胞。

    3、 收集病毒液。

    4、 纯化和浓缩病毒。

    5、 分装、- 80 oC保存。

    6、滴度测定及无菌检测。


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